Juliane Köhler, 1965 yılında Göttingen, Almanya'da doğdu. Köhler, 1985 ile 1988 yılları arasında New York'ta Uta Hagen'in yanında oyunculuk eğitimi aldı ve HB Studio'da eğitim gördü. Ayrıca Mükün'de bale eğitimi aldı. 1988'de Hannover'de Aşağı Saksonya Devlet Tiyatrosu'nda ilk sahne performansını sergiledi.
Köhler, kariyeri boyunca birçok önemli yapımda yer aldı. 1993 ile 1997 yılları arasında Bavarian State Theatre'da bir ansamble kadrosuna katıldı. Bu dönemde, 1997'de çekilen "Aimee & Jaguar" filmindeki rolüyle tanınma fırsatı yakaladı. Köhler, 2004 yılında "Çöküş" filminde Eva Braun'ı canlandırdı. Bu rolüyle, Köhler, uluslararası alanda tanınma fırsatı yakaladı. 2001 yılında "Afrika'da Bir Yerde" filminde rol aldı.