Justin Bruening, 1979 yılında Helena, ABD'de doğdu. Kariyerine moda modelliğiyle başladı ve McDonald's restoranında keşfedildi. Bir hafta içinde Bruce Weber ile fotoğraf çekimlerine başladı. Bruening, 2003 yılında All My Children adlı günlük dramada Jamie Martin rolünü canlandırmasıyla oyunculuk kariyerine başladı. Bu rolüyle 2005 yılında Soap Opera Digest Ödülü kazandı. Bruening, 2007 yılında Kara Şimşek adlı dizide Mike Traceur rolünü üstlendi. Bu rol, Kara Şimşek serisinin yeniden yapımında Michael Knight'in oğlu olarak yer aldı. Ayrıca, 2009 yılında Castle dizisinde Rob Tredwyck rolünü canlandırdı.
Bruening, 2013 yılında Grey's Anatomy adlı tıbbi dramada Matthew Taylor karakterini canlandırdı. Bu rolüyle 2013 ve 2018 yılları arasında dizide yer aldı. 2020 ile 2026 yılları arasında, Sweet Magnolias adlı dizinin ana kadrosunda yer aldı. Ayrıca, NCIS ve Lucifer gibi popüler dizilerde de rol aldı.