John Stamos, 1963 yılında Cypress, California'da doğdu. Oyunculuk kariyerine 1982'de başlayarak, ABC'in General Hospital adlı televizyon dizisinde Blackie Parrish karakterini canlandı. Bu rolüyle 1983'te Daytime Emmy Ödülü'ne aday gösterildi. Stamos, daha sonra Full House adlı sitcomda Jesse Katsopolis rolünü üstlendi ve bu rolüyle geniş bir hayran kitlesi kazandı. Full House, 1987 ile 1995 yılları arasında yayınlandı ve Stamos'un kariyerinin en önemli noktalarından biri oldu.

1995 yılında dizinin sona ermesinden sonra, Stamos çeşitli televizyon filmleri ve dizilerde rol aldı. 2005-2009 yılları arasında NBC'nin ER dizisinde Dr. Tony Gates rolünü canlandı.