Martha MacIsaac, 11 Ekim 1984 tarihinde Charlottetown, PE, Kanada'da dünyaya geldi. Çocuk yaşta oyunculuğa olan ilgisi artan MacIsaac, ilk televizyon rolünü Emily of New Moon dizisinde Emily Byrd Starr karakteriyle aldı. Bu dizinin başrolü, Lucy Maud Montgomery'nin aynı isimli romanına dayanarak yayınlandı. Emily of New Moon dizisi, MacIsaac'in oyunculuk kariyerinin başlangıcını işaret eden önemli bir projedi.

MacIsaac'in kariyerinin zirve noktası, 2007 yılında yayımlanan Superbad filmiyle geldi. Bu teen komedi filminde Becca karakterini oynayan MacIsaac, başrol oyuncu Evan'ın aşk ilgi olanını canlandırdı. Bu rol, onu daha geniş bir izleyici kitlesine tanıttı.