Johnny Whitworth, 1975 yılında Charleston, Güney Karolina, ABD'de doğdu. Özel bir kolej olan Asheville School'a gitti ve daha sonra New York'Un Lee Strasberg Theatre and Film Institute'e katıldı. Burada oyunculuk eğitimi aldıktan sonra kariyerine birçok televizyon dizisinde ve filmde yardımcı roller ile başladı.
Johnny Whitworth'in en ünlü rolleri arasında, FX'in "The Shield" dizisinde canlandırdığı Shane Vendrell ve "Jericho" dizisinde yapılan canlandırdığı Jake Green sayılabilir. Ayrıca "Nip/Tuck" dizisinde, "Dexter" dizisinde ve "Criminal Minds" dizisinde de konuk oyuncu olarak yer aldı. Whitworth, sinema filmi "Gattaca" ve "The Mist" de dahil olmak üzere birçok filmde de yer aldı.
Johnny Whitworth, kariyeri boyunca birçok ödül ve adaylık elde etti.