Don Knotts, 1924 yılında Morgantown, ABD'de doğdu. Kariyerine 1960 yılında başlayarak, 1960'ların başında The Andy Griffith Show'da Barney Fife rolünü canlandırarak ünlendi. Bu rolüyle beş Emmy Ödülü kazandı. Knotts, 1964'te The Incredible Mr. Limpet ve 1966'da The Ghost and Mr. Chicken filmlerinde de başrol oynadı.
Knotts, 1979 ile 1984 yılları arasında Three's Company dizisinde Ralph Furley rolünü üstlendi. Ayrıca, 1977'de The Love Boat ve 1961 ile 1962 yılları arasında The Tonight Show Starring Johnny Carson, The Mike Douglas Show, The Merv Griffin Show gibi popüler televizyon programlarına katıldı. Cesur Civciv, Yaşamın Renkleri, The Shakiest Gun in the West, Move Over, Darling, No Deposit, No Return, Gus, Lapacılar Çetesi, The Prize Fighter, Hermie: A Common Caterpillar gibi yapımlarda da yer aldı.