Alessandra Mastronardi, 18 Şubat 1986 tarihinde Napoli, İtalya'da doğdu. Oyunculuk kariyerine genç yaşlarda başlayan Mastronardi, gençliği boyunca bir dizi lokal tiyatro prodüksiyonunda yer aldı. Bu ilk adımlar, daha sonraki profesyonel kariyerine önemli bir temel oluşturdu. Mastronardi, 2007 yılında İtalyan televizyon dizisi "Prova a volare" ile ilk önemli rolünü alarak ekranlarda görünmeye başladı. Bu dizideki performansıyla dikkat çeken oyuncu, kısa sürede İtalyan sinemasında ve televizyonunda yerini sağlamlaştırdı.

Mastronardi'nin kariyerini yükselttiği bir dizi önemli proje, özellikle de "To Rome with Love" ve "Master of None" filmleriydi.